2）晚期凋亡（晚凋）
DNA降解：DNA被降解为约180~200bp的片段，这是晚凋的一个显著标志。
细胞膜破裂：细胞膜破裂，导致细胞内容物的释放。
检测方法：Annexin V/PI双染色法检测时，PI能透过破裂的细胞膜与DNA结合，因此晚凋细胞同时被Annexin V和PI染色。
DNA降解：DNA被降解为约180~200bp的片段，这是晚凋的一个显著标志。
细胞膜破裂：细胞膜破裂，导致细胞内容物的释放。
检测方法：Annexin V/PI双染色法检测时，PI能透过破裂的细胞膜与DNA结合，因此晚凋细胞同时被Annexin V和PI染色。
3）坏死
细胞膜破裂：坏死细胞的细胞膜破裂早于DNA降解，导致细胞内容物外溢，引起局部炎症反应。
检测方法：与晚凋细胞一样，在坏死细胞中，PI能透过坏死的细胞膜与DNA结合，因此坏死细胞能同时被Annexin V和PI染色。但PI染色会更为强烈一些，因为细胞膜破裂严重。
细胞膜破裂：坏死细胞的细胞膜破裂早于DNA降解，导致细胞内容物外溢，引起局部炎症反应。
检测方法：与晚凋细胞一样，在坏死细胞中，PI能透过坏死的细胞膜与DNA结合，因此坏死细胞能同时被Annexin V和PI染色。但PI染色会更为强烈一些，因为细胞膜破裂严重。
02
细胞凋亡流式图怎么看？
案例1
元素解读
①纵坐标代表该细胞样本在这个通道上的荧光强度；PI是一种核酸染料，用于检测细胞凋亡，细胞膜完整的情况下无法进行细胞染核
②横坐标代表该细胞样本在这个通道上的荧光强度；Annexin V是用于检测细胞凋亡的试剂（原理详见基础概念），Annexin V可带上荧光素（如FITC、APC等）
③一个点代表一个细胞
④（PI-/Annexin V-）双阴性，为活细胞，占比是90.6%
⑤（PI+/Annexin V-），为机械损伤等其他细胞，占比是0.06%
⑥（PI-/Annexin V+），为早凋细胞，占比是9.20%
⑦（PI+/Annexin V+），为晚凋细胞和坏死细胞，占比是0.16%
//////
案例2
元素解读
①变量：是否进行UVB照射
②对照组
③一种药物
结果解读
Annexin V-FITC/PI双染显示，UVB（+）组中凋亡细胞的比例显著增加（占比23.2%），但在silibinin治疗后细胞凋亡的比例降低（占比7.4%）。
03
流式细胞术中的“设门”是什么？
设门就是在流式细胞仪生成的散点图或直方图上，通过手动或自动的方式划定一个或多个区域（即“门”），这些区域代表了具有特定特征的细胞群体（通俗点说，设门就是选中目标研究细胞群）。
设门的形状可以是任意的，如线性门、矩形门、圆形门、椭圆形门、多边形门和四象限门（十字门）等，具体形状取决于细胞类群分布的特点和研究目的。
04
如何正确设门？
1）明确分析目的
在设门之前，首先要明确分析的目的，即需要区分哪些细胞群体。这有助于在复杂的细胞分布图中快速找到目标细胞。
2）选择合适的参数
流式细胞术可以检测多种参数，如前向散射光（FSC）、侧向散射光（SSC）、荧光强度等。根据分析目的选择合适的参数进行设门。例如，FSC和SSC常用于区分细胞大小和颗粒度，荧光强度则用于检测细胞内的特定分子。
3）设定阈值
使用FSC或SSC等物理信号设定阈值，以排除细胞碎片、气泡和激光背景噪声等干扰因素。阈值设定应尽可能客观，以减少主观判断带来的误差。
4）联合设门
利用多个参数联合设门可以更加准确地区分细胞群体。例如，可以使用FSC和SSC联合设门来区分不同大小的细胞群体，再结合荧光信号进一步区分表达特定分子的细胞。
5）应用荧光阴性对照
在设门过程中，应用合适的荧光阴性对照有助于区分阳性信号和阴性的荧光背景。这可以提高设门的准确性和可靠性。
6）排除死细胞
通过检测细胞活性的标记（如PI或7-AAD）来区分活细胞与死细胞。在设门时，应确保将死细胞排除在分析区域之外。
7）使用共享标记物
如果合适，可以使用一种在所有目标细胞中都表达的共享标记物（如CD45白细胞标记）进行染色。这有助于在分析稀少细胞类型时提高设门的准确性。
8）验证设门结果
设门完成后，应使用显微镜观察或其他验证手段来确认设门的客观性和准确性。这有助于减少主观判断带来的误差。
以上就是今天的相关内容，继续期待下期【 文献读图】的精彩内容吧~
· 文献读图攻略领取 ·
点击下方名片
关注【立效研究院】
后台回复以下关键词获取完整版PDF资料
文献读图
声明：本文提供的部分资料综合整理自网络，仅供学习和研究使用。
数据分析工具不会用？数据挖掘无从下手？
与其花半年自学，磨个1年没结果
不如交给专业团队，最快10天出成果！
基础&临床
数据分析服务
8年服务经验，20000+成功案例
数据分析0失误率，成果真实有效
👇服务答疑环节👇
Q1
服务靠谱吗，分析师是否专业？
团队——「教授级」水平
一流服务团队，来自985/211顶尖院校
深耕医学生物领域，20+数据分析工具手拿把掐
结果——100%真实有效
尊重原始数据，最大程度挖掘有效结果
单位是否认可？放心！绝对认可！
隐私——密上加密
业务开展前期签署保密协议
个人隐私绝对安全
抢发SCI
评职称的要求达到了，心里美滋滋~
即刻咨询，抢占先机👇
Q2
多久能拿结果，数据会泄露吗？
速度比找课题还快！
3天定方案，10天拿结果
加快文章完稿，SCI发表不耽误
数据比锁保险箱里还保险！
正规企业，诚信经营！
数据泄露0发生，100%严格保密！
同事文章都投稿了，你还在犹犹豫豫?
即刻咨询，早定早享受 👇返回搜狐，查看更多